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异相酶免疫试验和均相酶免疫试验

2021.10.14

  Ag为待测抗原,AgAb-E为结合标记物,Ab-E为游离标记物。若抗原-抗体反应影响标记物中酶的活性,如酶活性消失,即结合标记物(AgAb-E)无酶活性,游离标记物(Ab-E)有酶活性;

  (1) 检测时不需分离结合标记物(AgAb-E)和游离标记物(Ab-E),检测体系中标记物酶活性(Ab-E)与抗原含量成反比,此为均相酶免疫试验,抗原-抗体反应均在液相中进行。

  (2) 而抗原-抗体反应未影响标记物中酶的活性,检测时需分离结合标记物(AgAb-E)和游离标记物(Ab-E),结合标记物酶活性与抗原含量成正比,此为异相酶免疫试验。异相酶免疫试验又可根据反应体系中是否使用固相支持物作为抗体(抗原)的载体,将其分为液相和固相酶免疫试验两种类型。

  2、ELISAPOT基本原理;

  ELISAPOT即酶联免疫斑点检测,结合了细胞培养技术与ELISA技术,能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。

  ELISAPOT从本质上说和ELISA的原理是一样的。

  细胞受到刺激后局部产生细胞因子,此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后,被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。

  BCIP/NBT 底物孵育后,PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子,通过ELISPOT 酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。

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