一、材料
1. 缓冲液和溶液
乙酸铵（10 mol/L )
乙醇
酚：氯仿（1:1，V/V)
2. 酶和缓冲液
适当的限制性内切核酸酶
小牛胸腺末端转移酶
5X 末端转移酶缓冲液
3. 核酸和核苷酸
模板 DNA ( 0.1~5 μg）
4. 放射性化合物
[α-32P] 3' 脱氧腺苷三磷酸（10 mCi/ml，比活性 5000 Ci/mmol)
或
[α-32P] 双脱氧 ATP ( 10 mCi/ml，3000 Ci/mmol)
5. 专用设备
Sephadex G-50 离心柱，用 TE ( pH 7.6) 平衡
二、方法
1. 用适当的限制性内切核酸酶消化 0.1~5 μg 模板 DNA。
2. 用酚：氯仿抽提及标准乙醇沉淀纯化 DNA。
3. 将消化的 DNA 溶于 10 μl 5X 末端转移酶缓冲液和 34 μl 水中。
4. 加入 5 μl 10 mCi/ml [α-32P] 3' 脱氧腺苷 5'-三磷酸（5000 Ci/mmol）或 [α-32P] 双脱氧 ATP ( 3000 Ci/mmol) 和 1 μl 牛胸腺末端转移酶（约 20 单位）。
5. 37℃ 温育反应 1 h。
6. 用 Sephadex G-50 离心柱层析或在 2.5 mol/L 乙酸铵的存在下进行两轮乙醇沉淀，以分离标记的 DNA 与未掺入的 [α-32P] 3' 脱氧腺苷 5'-三磷酸（或 [α-32P] 双脱氧 ATP）。
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