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糖原染色标准操作规程

2019.4.28

1. 实验原理

过碘酸是氧化剂,使含有乙二醇基(-CHOH—CHOH)的多糖类物质(糖原粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等)氧化,形成双醛基(—CHO—CHO)。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合,使无色的品红变成紫红色化合物,定位于含有多糖类的细胞内。

2. 标本采集

2.1 病人准备:了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病,穿刺部位有炎症或有畸形,晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

2.2 标本种类:新鲜抽取的骨髓穿刺液

2.3 标本采集要求

2.3.1 高压消毒的穿刺针,一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

2.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘;翻身困难,需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部位。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

3. 标本储存:滴加固定液盖满血膜5分钟,水洗待干室温避光保存。

4. 标本运输:室温运输

5. 标本拒收的标准:溶血、稀释标本不能作测定

6. 试剂

6.1 试剂名称:血细胞PAS染色测定

6.2 试剂生产厂家:上海太阳生物技术公司

6.3 试剂组成

试剂1:PAS固定液,10%甲醛甲醇溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六个月。

试剂2:PASⅠ液,10g/L(1%)过碘酸溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六个月。

试剂3:PASⅡ液,又称Schiff氏液。2℃-8℃避光保存,有效期六个月。

试剂4:苏木素复染液。2℃-8℃避光保存,有效期六个月。

7. 操作步骤

7.1 涂片滴加固定液5-8滴,盖满血膜即可,5分钟,水洗待干。

7.2 滴加Ⅰ液10分钟,水洗待干。

7.3 置入Ⅱ液内室温(20~25℃左右为宜)暗处放置30分钟,然后流水冲洗数分钟。

7.4 苏木素复染1~2分钟,水洗待干,镜检。

8. 结果判断

8.1 阳性结果—细胞内出现红色沉淀物,定位于胞质。

8.2 阴性结果—细胞内无红色沉淀物。

9. 临床意义

9.1 粒细胞系统自早幼粒阶段以下均可呈阳性,且随细胞分化而加强。

9.2 单核细胞系统可呈弥散状弱阳性伴细颗粒状。

9.3 淋巴系统可呈快状或粗颗粒状阳性。

9.4 巨核细胞系统(血小板)可呈粗块状或团块状阳性。

9.5 红细胞系统正常情况下呈阴性,当某些疾病时可呈阳性,如MDS,AML-M6时。

10. 操作性能:快速简便,特异性强,灵敏度高。

11. 方法局限性

11.1 标本应新鲜,且未受其他化学物品污染。

11.2 滴加Ⅰ液后水洗应充分,然后待涂片完全干燥后才能置入Ⅱ液内。

11.3 PASⅡ液保存不当或时间过久将会变红,并使阳性强度降低,且不能反复使用。

12. 参考文献

12.1 叶应妩,王毓三,等,全国临床检验操作规程,第三版,中华人民共和国卫生部医政司,2006

12.2刘成玉主编﹒临床检验基础实验指导﹒第二版·人民卫生出版社,2003


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