利用EarlyTox细胞活力检测试剂盒评估GM-CSF和TNFα诱...（二）
利用EarlyTox细胞活力检测试剂盒评估GM-CSF和TNFα诱导的细胞凋亡
Caspase-3/7 R110测定:底物测定缓冲液 由酶底物(AC-DEVD)2-R110 (2 mM)加入细胞裂解/测定缓冲液中并以50 µL对1 mL的 比例混合而成。100 µL底物测定缓冲液加 入到每个孔中，形成每孔终体积为200 µL 和终浓度为50 µM体系。样品接下来在室温下避光孵育1小时。使用表1中的设置在 SpectraMax i3x读板机上检测荧光。
Caspase-3/7 NucView 488测定：10µM2X的NucView 488底物工作液混合于PBS中。100µL底物工作液加入含有100 µL细 胞和培养基的孔中形成终浓度为5µM。细 胞在室温下避光孵育1小时。使用 SpectraMax MiniMax细胞计数仪在 541nm绿色荧光通道下进行图像采集，或者在SpectraMax i3x读板机上检测。请见 表1读板机设置。
结果
结果显示U937细胞在用TNFα处理时会以剂量和时间依赖的方式经历凋亡过程。 GM-CSF对U937细胞处理达48小时却无任 何效果。然而，可以观察到当细胞与TNFα和GM-CSF混合物一起孵育时会出现明显的协同作用.曾经报道过单独的GM-CSF 相对于TNFα需要更长时间(72小时后)才能 通过caspase 3类通路诱导U937细胞的凋亡，而这两种细胞因子的协同作用却可以 在24小时后观察到。在我们的研究中，这一协同性直到48小时后才变得明显。请见图2-5。
总结
通过使用三种不同试剂来检测细胞凋亡的不同数据，我们阐明了即混即读式的实验模板可简化悬浮细胞的测定过程。 SpectraMax i3x读板机的孔域扫描功能降低了孔与孔之间的差异，校正了整孔细胞生长和分布不均一的问题。细胞活力检测 试剂家族提供给研究者们多种多样的检测 凋亡和/或细胞死亡等细胞事件的有力工 具。
参考文献
Okuma E., Saeki K., Shimura M., Ishizaka Y., Yasugi E., Yuo A. Induction of apoptosis in human hematopoietic U937 cells by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor: possible existence of caspase 3-like pathway. Leukemia (2000) 14, 612-619.
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