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关于蛋白层析纯化系统缓冲液的更换方法分享

2021.8.29

  蛋白层析纯化系统采用高度灵活配置的模块化设计,具有许多优点来进行快速、灵活、稳定的纯化。

  硬件的所有阀门、检测器和层析柱均面向操作者安装,方便清楚、直观地了解各个模块之间的关系和样品以及缓冲液的流路。

  将样品环上样改进为直接上样,入口可实现系统和层析柱的自动清洗。从一个纯化任务转向另一个纯化任务仅仅需要几分钟,在保持准确性和确保重复性的同时,大大地节省制备时间。

  蛋白层析纯化系统缓冲液的更换方法:

  虽然更换缓冲液不能提高蛋白纯度,但它却在蛋白纯化方案中起着极其重要的作用。不同的蛋白纯化方法需要不同pH及不同离子强度的缓冲液。

  假如你用硫酸铵将蛋白沉淀出来,毫无疑问蛋白是处在高盐环境中,需要想办法脱盐,可用的方法有利用半透膜透析,通过勤换透析液体去除盐分,此法尚可,但需几个小时,通常要过夜,也难以用予大规模纯化中。

  新型的设备将透析膜夹在两个板中间,板的一侧加缓冲液,另一侧加需脱盐的蛋白溶液,并在蛋白溶液一侧通过泵加压,可以使两侧溶液在数小时内达到平衡,若增加对蛋白溶液的压力,还可迫使水分和盐更多通过透析膜进入透析液达到对蛋白浓缩的目的。

  也有出售的脱盐柱,柱内的填料是小孔径的颗粒,蛋白分子不能进入孔内,先于高浓度盐离子从柱中流出,从而使二者分离。

  蛋白层析纯化系统的每一步都会造成目的蛋白的丢失,缓冲液平衡的步骤尤甚。蛋白会结合在任何它能接触的表面上,剪切力、起泡沫和离子强度的快速变化很容易让蛋白失活。




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