荧光定量pcr的标准曲线怎么做
采用相对法定量要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiency
curve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率的引物,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者可以采用一个一直质量好的rna样品,如细胞株,然后以此为标准制作.如果直接采用dna做标准,那前提是rna逆转录的效率一致.
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采用相对法定量要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiency
curve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率的引物,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者可以采用一个一直质量好的rna样品,如细胞株,然后以此为标准制作.如果直接采用dna做标准,那前提是rna逆转录的效率一致.
