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怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线

2021.6.14

荧光定量pcr的溶解曲线理解:用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一。应结束后,逐渐加温。和Syber
Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber
Green结合。

一般每加温一度,读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化,开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的。

接近Tm时,突然变化加大,所以出现峰值。再升温,产物全部解离,就又是一条直线了。如果有非特异性产物,在加热过程中就会出现一些比较矮,宽的峰。


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