免疫荧光技术(immunofluorescent technique)简介
1、荧光免疫测定技术的概念
将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。
2、技术分类
（1）荧光抗体技术（荧光显微镜技术）：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。
（2）免疫荧光测定技术：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。
3、荧光的产生
物质吸收外界能量而进入激发状态，在恢复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。 由光激发所引起的荧光，为光致荧光------荧光免疫技术 ； 由化学反应所引起的荧光，为化学荧光------化学发光技术。
4、荧光素的荧光特性
（1）停止供能，荧光现象随即终止。
（2）对光的吸收和荧光的发射具高度选择性。入射光波长<发射光波长。
（3） 荧光效率： 发射荧光的光量子数
荧光效率=---------------------------
吸收光的光量子数
（4）荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱。
5、常见荧光素及其特性
（1）FITC：黄色结晶粉末，吸收光490~495nm，发射光520~530nm，明亮的黄绿色荧光。
（2）RB200：橘红色粉末, 吸收光570nm，发射光595~600nm，橘红色荧光。
（3）TRITC：紫红色粉末，吸收光550nm，发射光620nm，橙红色荧光。
（4）镧系：Eu3+、Tb3+等。
（5）PE：吸收光490~560nm，发射光595nm，红色荧光。
（6）其它：酶作用后产生荧光物质，具体如下表：
酶 底物 产物 激发光 发射光
B-G MUG MU 360 450
AP MUP MU 360 450
HRP HPA 二聚体 317 414
6、合适荧光素的选择
（1） 具有与蛋白质形成共价键的化学基团。
荧光素-N=C +NH-蛋白质 荧光素-N-C-N-蛋白质
‖ ︱ ︱‖ ︱
S H H S H
（2）荧光效率高，标记后下降不明显。
（3） 荧光色泽与背景色泽对比鲜明。
（4）标记后能保持生物学活性和免疫活性。
（5）标记方法简单、快速。
（6） 安全无毒。
