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谷胱甘肽的高效液相色谱法测量相关介绍

2022.4.24

  原理:高效液相色谱法是由于溶质在同定相和流动相之间的分配系数、亲和力、分子大小、吸附能力等不同,而进行连续分离的过程。

  操作步骤:

  ①色谱条件

  色谱柱:Kromasil C18柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm)。

  流动相:磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液(磷酸二氢钠3.0 g、辛烷磺酸钠1.0 g,加水溶解并定容至500 mL,用磷酸调溶液pH为3):乙腈 = 96:4(体积比)。

  检测波长:210 nm,流速0.8 mL/min,柱温30℃,进样量10 μL [9] 。

  ②制作标准溶液

  准确称取谷胱甘肽标准品适量,用去离子水溶解于容量瓶中,混合均匀,定容,制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列浓度样品液,作为标准溶液 。

  ③样品制备

  准确称取谷胱甘肽样品,加去离子水,混合均匀,制成浓度为25 ~ 800 μg/mL的样品溶液,作为分析溶液 。

  ④绘制标准曲线

  将配置的谷胱甘肽标准液,分别吸取10 μL进样测定,以谷胱甘肽谷胱甘肽生产技术浓度和峰面积绘制其标准曲线,根据标准曲线得出该曲线的回归方程。峰面积的变化应与谷胱甘肽的质量浓度呈线性关系,其拟合度应达0.9995以上 。

  ⑤样品的测定

  取谷胱甘肽样品分析液10 μL,用高效液相色谱仪进样测定,得到样品溶液的峰面积,根据回归方程计算出谷胱甘肽的含量。

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