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HPLC-UV快速检测原奶中的三聚氰胺

2020.3.09

图1. 低浓度标样线性。

本文采用北京普析通用仪器有限公司的L6系列高效液相色谱仪，北京艾杰尔科技的三聚氰胺快速分析柱，建立了原料乳中三聚氰胺的HPLC-UV快速检测方法。原料乳中的三聚氰胺经GB/T22400-2008的标准方法处理后，使用0.050mol/L的磷酸盐缓冲液和乙腈为流动相，采用高效液相色谱仪进行测定，最低检测限为0.0032mg/L，回收率为103.6%~105.2%，0.005~50mg/L之间有良好的线性关系（R>0.9999）。结果表明，本方法简便、快捷、准确，适合大批量样品的测定。

三聚氰胺，简称三胺，分子式C3N6H6，是一种重要的氮杂环有机化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮测定法测奶粉和食品中的蛋白质含量时不能排除这类伪蛋白氮的干扰，因而一些厂商为了降低成本而添加这种化工原料，以提高产品中蛋白质含量。《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。近期的“三鹿奶粉”事件，就是因为不法分子掺卖混有三聚氰胺的奶粉，导致许多婴儿肾结石，造成了严重的后果。本文采用北京普析通用仪器有限公司的L6-1系列高效液相色谱仪和北京艾杰尔科技的三聚氰胺快速分析方法包，依据GB/T22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》建立原奶中三聚氰胺快速、准确的检测方法。

实验部分

仪器与试剂

仪器：L6-1系列高效液相色谱仪（北京普析通用公司），包括L6-P6二元高压输液泵，L6-UV6可变波长紫外检测器；三聚氰胺快速分析方法包（北京艾杰尔科技有限公司）：包括Venusil M-SCX，5μm，4.6×250mm强阳离子交换柱（科技部“十一五”国家支撑计划成果）及保护柱；针式过滤器（Agela Clarify，0.22/0.45μm，尼龙/MCM）；三聚氰胺标准品（>99%）；空白原奶样品（北京奶牛中心提供）。

图2. 高浓度标样线性。

试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。

色谱条件

色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱（4.6×250mm，5μm，150?）（科技部“十一五”国家支撑计划成果）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70:30（流动相不需调整pH值）；流速：1.5ml/min；柱温：室温；波长：240nm；实验中若非特别注明，进样量均为20μl。

图3. 重复性谱图。

试样的制备

称取混合均匀的14.89g原料乳样品（准确至0.01g），置于50ml具塞刻度试管中，加入30ml乙腈，剧烈振荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

图4. 检出限谱图。

三聚氰胺标准曲线工作液的配制

■三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×103mg/L：称取100mg三聚氰胺标准物质（准确至0.1mg），用水完全溶解后，100ml容量瓶中定容至刻度，混匀。

标准工作溶液

■标准溶液A：2.00×102mg/L：准确移取20.0ml三聚氰胺标准贮备溶液，置于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

图5. 空白原奶样品测试及重复性。

■标准溶液B：0.50mg/L：准确移取0.25ml标准溶液A，置于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

■标准工作液的配制

表1. 标准工作液配制（高浓度）

按表1分别移取不同体积的标准溶液A于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。按表2分别移取不同体积的标准溶液B于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。

表2. 标准工作液配制（低浓度）

结果与讨论

线性范围

根据国标要求绘制低浓度和高浓度两条标准曲线：低浓度曲线取0.005mg/L、0.01mg/L、 0.02mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L等5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如图1所示。高浓度曲线取0.2mg/L，0.5mg/L，2mg/L，5mg/L，20mg/L，50mg/L 6个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如图2所示。