奶品中三聚氰胺的常规检测和GCMS确证（一）
图1. 三聚氰胺硅烷化衍生物TIC图。
三鹿奶粉事件发生的第一时间，岛津公司即推出两种不同的方法用于奶粉、奶制品中三聚氰胺的检测，其中反相离子对色谱法测定奶粉中三聚氰胺含量，操作简便，检测快速； GCMS气质联用仪检测法具有灵敏度高、重现性好和可靠性高等优点，定量检测限可达5μg/kg，可以有效检测样品中所含的微量三聚氰胺。
三聚氰胺（melamine）简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量为66.6％，加入宠物饲料和牛奶中可以大幅提高蛋白质测定表观含量，但食用后可诱发肾衰竭并导致死亡。2007年，国内外发生多起宠物因食用添加了三聚氰胺的宠物食品而致死的例子，大量相关产品被召回。2008年9月，国内发生奶粉中三聚氰胺导致婴幼儿肾结石和肾功能衰竭甚至死亡的恶性事件。
奶粉、奶制品中三聚氰胺的检测方法主要有HPLC紫外检测、GCMS和LC-MS/MS串级质谱检测。HPLC紫外检测样品处理简单，但检测限较高且易受干扰。LC-MS/MS串级质谱可以弥补HPLC液相紫外检测的缺点，但仪器成本高昂、操作复杂，不利于常规检测。GCMS检测具有灵敏度高、抗干扰性强、可靠性高等优点，缺点是样品必须进行硅烷化衍生后才能检测。
图2. 三聚氰胺硅烷化衍生物质谱图。
本文参考农业部NY/T 1372-2007饲料中三聚氰胺测定方法中的样品提取纯化过程，介绍了两种检测方法，一是采用反相离子对色谱法测定奶粉中三聚氰胺含量，操作简便，灵敏度高；二是使用GCMS对奶粉和奶制品中三聚氰胺含量进行检测。
GCMS检测法
利用三氯乙酸超声萃取样品中三聚氰胺，经混合型阳离子交换柱固相萃取净化后进行硅烷化衍生，再由GCMS进行检测。方法重现性良好，RSD<2%，最低定量检测限为5μg/kg,在0.02~2μg/ml浓度范围具有良好的线性。
表1. 重现性考察数据
样品前处理
（1）超声萃取
称取5g样品，加入50ml三氯乙酸溶液和2ml乙酸铅溶液，超声萃取20min。取上层液30ml，高速离心5min。
（2）SPE净化
3ml甲醇、3ml水依次活化SPE柱，取10ml离心液上柱，再用3ml水、3ml甲醇洗涤SPE柱，用3ml 5%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液氮气吹干，20%甲醇溶液定容至2ml。
（3）衍生化
取适量上述甲醇定容溶液，氮气吹干，加入200ul吡啶和200ul衍生化试剂（BSTFA＋1%TMCS），70℃反应30min。
配制三聚氰胺标准浓度系列，取适量作同步衍生。
图3. 三聚氰胺标准曲线。
仪器条件
岛津GCMS-QP2010 Plus气质联用仪；色谱柱：Rtx-5MS, 30m×0.25mmID×0.25um；柱温：100℃（1min）_10℃/min_210℃（3min）_50℃/min_300℃（2min）；柱流量：1.0 ml/min ；流速控制方式：恒线速度方式；进样口温度：250℃；进样方式：不分流（1min）；高压进样：250Kpa（1min）；离子源温度：230℃；接口温度：300℃；扫描质量范围：
60~400amu；定量采用SIM方式：定量离子为327.2，参考离子为171.1，342.2，99.1。
实验结果
（1）三聚氰胺标准溶液（0.1μg/ml）硅烷化衍生物扫描总离子流图及质谱图如图1、图2所示。
（2）配置6个浓度点标准溶液，浓度分别为：0.02，0.05，0.1，0.5，1.0和2.0μg/ml，经硅烷化反应后进样，得到标准曲线如下图3所示，相关系数R = 0.99928。
（3）对0.1μg/ml浓度标样硅烷化衍生物平行进样5次，考察峰面积重现性，得到RSD为1.231%，重现性良好。数据如表1所示：
（4）在经检测不含三聚氰胺的空白奶粉中添加三聚氰胺标样考察回收率，添加浓度为0.4μg/ml，实际检测浓度为0.396μg/ml，回收率为99%。检测数据如下：
（5）对0.02μg/ml标准溶液数据，通过GCMSsolution软件计算仪器定量检测限（10倍信噪比）为5μg/L。按上述样品前处理过程计算出奶粉和奶制品中三聚氰胺的定量检测限为5μg/kg。
（6）实际奶粉样品测试，取5g某品牌奶粉，按上述前处理方法制备样品，进样得到如下谱图，此样品中检出三聚氰胺，浓度为1.473mg/kg。
结论
使用GCMS气质联用仪检测奶粉和奶制品中三聚氰胺含量具有灵敏度高、重现性好和可靠性高等优点。本方法中仪器在0.02~2μg/ml浓度范围内线性良好，定量检测限可达5μg/kg，可以有效检测样品中所含的微量三聚氰胺。
反相离子对色谱法
采用C8反相色谱柱，以缓冲液-乙腈（70:30，pH=3.0）为流动相，检测波长235nm，流速1ml/min，柱温40℃。结果表明，该方法保留时间在11min左右，精密度、线性关系均较好，检测限低。本方法对仪器要求低，使用等度系统和紫外可见检测器即可，适合于乳品相关企业用来作为三聚氰胺的检测方法。
