门冬氨酸鸟氨酸的检查方法
酸度取本品0.50g,加水20ml溶解后,依法测定(通则0631),pH值应为6.0~7.0。溶液的透光率取本品0.5g,加水20ml溶解后,照紫外可见分光光度法(通则0401),在430nm的波长处测定透光率,不得低于98.0%有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品约0.4g,精密称定,置100m量瓶中,加0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液40ml使溶解,用乙腈稀释至刻度,摇匀。对照溶液精密量取供试品溶液适量,用流动相定量稀释制成每1m1中约含门冬氨酸鸟氢酸4g的溶液。各杂质对照品溶液取马来酸、富马酸、精氨酸、杂质I与杂质Ⅱ各对照品适量,精密称定,分别加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中各约含4g的溶液。系统适用性溶液取门冬氨酸鸟氨酸、马来酸、富马酸、精氨酸、杂质Ⅰ与杂质Ⅱ各对照品适量,置同一量瓶中,加流动相适量使溶解并稀释制成每1m中约含门冬氨酸鸟氨酸4mg,马来酸、富马酸、精氨酸、杂质I与杂质Ⅱ各4μg的溶液。色谱条件用氨基键合硅胶为填充剂;以0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾2.72g,加水500ml溶解后,加入浓氨溶液5m,用水稀释至1000ml,混匀后用磷酸调节pH值至5.60±0.05)乙腈(40:60)为流动相;检测波长为205nm;流速为每分钟1.3ml;柱温为30℃;进样体积20l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,门冬氨酸、鸟氨酸、马来酸、富马酸、精氨酸、杂质Ⅰ与杂质Ⅱ峰之间的分离度均应符合要求。测定法精密量取供试品溶液、对照溶液与各杂质对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至门冬氨酸峰保留时间的4倍。
限度供试品溶液色谱图中如有与各杂质对照品溶液主峰保留时间相同的色谱峰,按外标法以峰面积分别计算各已知杂质的含量,含马来酸、富马酸与精氨酸均不得过0.1%,含杂质I不得过0.1%(供注射用)或0.3%(供口服制剂用),含杂质Ⅱ不得过0.15%;其他单个未知杂质的峰面积均不得大于对照溶液两主峰面积之和(0.1%);杂质总量不得过0.5%(供注射用)或1.0%(供口服制剂用)。
氨基酸峰面积比照有关物质检查项下的色谱条件,取有关物质项下的供试品溶液连续进样5次,记录色谱图,门冬氨酸与鸟氨酸峰面积的相对标准偏差均不得大于2.0%。门冬氨酸与鸟氨酸峰面积之比的平均值应为2.61~3.01蛋白质取本品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含5mg的溶液,加等体积的30%磺基水杨酸溶液,不得产生浑浊。氯化物取本品0.10g,依法检查(通则0801),与标准氯化钠溶液30ml制成的对照液比较,不得更浓(0.03%)硫酸盐取本品1.0g,依法检查(通则0802),与标准硫酸钾溶液2.0m1制成的对照液比较,不得更浓(0.02%)铵盐取本品0.10g,依法检查(通则0808),与标准氯化 铵溶液4.0ml制成的对照液比较,不得更深(0.04%)钡盐取本品1.0g,加水20ml溶解后,滤过,滤液分成两等份,一份加临用新制的硫酸钙试液1ml,另一份加水1ml,静置15分钟,两种溶液均应澄清。
干燥失重取本品,在120℃千燥至恒重,减失重量不得过7.0%(通则0831)炽灼残渣取本品1.0g,依法检查(通则0841),遗留残渣不得过0.1%。铁盐取本品0.50g,依法检查(通则0807),与标准铁溶液1.5m1制成的对照液比较,不得更深(0.003%重金属取本品1.0g,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之十。砷盐取本品1.0g,加水23m1溶解后,加盐酸5ml,依法检查(通则0822第一法),应符合规定(0.0002%)
