快速考马斯亮蓝染色实验
| 实验材料 | |
|---|---|
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、凝胶染色1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的微波炉专用塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的 mini 胶（8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。 2.用微波炉的最大功率加热凝胶直至溶液沸腾（约需 2 min)。 3.室温轻轻摇动凝胶，使之冷却 5 min。 4.弃去用过的试剂 A，用水快速地冲洗一下凝胶。这时，即使在蓝色的背景下也可以看到蛋白含量在 IOOng 以上的蛋白条带显现出来。 5.加入 IOOml 试剂 B，用微波炉的最大功率加热凝胶直至溶液沸腾（约需 80s)。 6.弃去热试剂 B，用水冲洗凝胶。此步完成后可见蛋白含量在 50 ng 以上的条带。 7.加入 IOOml 试剂 C，并用微波炉的最大功率加热凝胶直至溶液沸腾（约需 80s)。 8.弃去热试剂 C，用水冲洗凝胶。这样，蛋白含量在 25ng 以上的蛋白条带可显现。 二、凝胶脱色9.加入 IOOml 试剂 D，并用微波炉的最大功率加热凝胶直至溶液沸腾（约需 80s)。 10.在溶液中放人 Kimwipe 纸巾，吸取多余染料。 11.室温冷却凝胶 5 min。此时，蛋白含量大于 5ng 的条带也能显现。 12.重复步骤9~10 两次以上，或将凝胶放在试剂 D 中于室温摇动 15 min 以上。 这时，某些仅含有 2.5ng 蛋白的条带也能显现。 展开 |
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