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细胞骨架观察实验—考马斯亮蓝染色法

2019.4.04


实验方法原理	荧光免疫染色法显示细胞骨架具有清晰优点，但操作过程较复杂；考马斯亮蓝染色法简便易行，清晰度稍差，但如分化处理适当能提高清晰度。
实验材料	细胞
试剂、试剂盒	磷酸二氢钠磷酸氢二钠戊二醛甲醇冰醋酸蒸溜水考马斯亮蓝
仪器、耗材	培养瓶
实验步骤	1. 固定液准备 0.1 M 磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O） 14.0 ml 0.1 M 磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O） 36.0 ml 蒸馏水 50.9 ml （以上各液相混合后再加戊二醛） 25 %戊二醛 50.0 ml 染色液：甲醇 46.5 ml 冰醋酸 7.0 ml 蒸溜水 46.5 ml （以上各液相混合后再加染）考马斯亮蓝 0.2g 2. 培养细胞用支持物盖片培养法； 3. 固定从培养瓶中取出细胞盖片，投入固定剂中固定15 分钟； 4. 漂洗取出盖片先置蒸馏水中漂洗2 分钟，再用蒸馏水洗两次，每次1 分钟； 5. 染色在考马斯亮蓝液中染色60 分钟； 6. 按4程序漂洗； 7. 分化置入含甲醇冰醋酸液碟皿中（不含染料），在倒置显微镜直接窥视下，见细胞质内微丝逐渐明显，背地清亮时便终止； 8. 漂洗按4处理； 9. 脱水→各度酒精→二甲苯； 10. 封片用树胶封固； 11. 结果细胞内微丝呈蓝色，如分化较好时背地清亮，反之会影响微丝的清晰度。

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