植物DNA的提取及凝胶电泳分析
实验概要
利用基因组DNA较长的特性，可以将其余细胞器或质粒等小分子DNA分离。当加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，可用玻璃棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到分离提取的目的。分离基因组DNA应尽量在温和的条件下操作。
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶是分离和纯化DNA片段的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离小分子的核酸；琼脂糖凝胶孔径较大，被应用于大分子核酸的分离和纯化。在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中，DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶（EB）染色，在紫外光下至少可以检测出1~10ng的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置(附电泳图)。
主要试剂
CTAB 氯仿 乙戊醇 乙醇 异丙醇 酚 NaAc Tris碱 EDTA RnaseA NaCl硼酸 Tris碱 EB 琼脂糖 溴芬兰等
实验步骤
（一）简易提取
1、在50ml带盖离心管（放在-20度预冷）中加入20ml提取缓冲液I，60℃水浴预热。
2、水稻幼苗或叶子5~10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30~60分钟（时间长，DNA产量高），不时摇动。
3、加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止损伤皮肤），室温下静止5~10分钟，使水相和有机相分层（必要时可重新混匀）。
4、室温下5000rpm离心5分钟。
5、仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6、在1.5ml eppendorf 管中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。
7、如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8、将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管。
9、加入5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃ 10分钟，除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10、加入1/10体积的3mol/L NaAc 及2×体积的冰乙醇，混匀，-20℃放置20分钟左右，使DNA形成絮状沉淀。
11、用玻璃捞出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干净吸水纸上吸干。
12、将DNA重新溶解于1 ml TE中，－20℃贮存。
（二）微量提取
1、取50px新鲜叶片冰冻研钵中，剪碎加1ml 2XCTAB提取液（预热），研磨，转移至1.5ml离心管。
2、室温下稍离心30秒。
3、取400μl上清液于新管中，加酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）400μl，缓慢颠倒混匀，室温下5000g（rpm）离心20分钟。
4、取上清，加等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢颠倒混匀，室温下10000g离心5min.
5、取上清，加2V无水乙醇，缓慢颠倒混匀。静止3min，13000rpm离心5min.
6、去上清，加70%乙醇中洗管壁，并静止1min，去乙醇，风干。
7、用50μl TE重悬DNA。
(三) 电泳步骤
1、稀释缓冲液的制备 用5XTBE配置成0.5×TBE稀释缓冲液,待用。
2、胶液的制备 称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE
3、稀释缓冲液，放入微波炉（或电炉）上加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。
4、胶板的制备 将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上，上样品梳子。向冷却至50～60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭（EB）溶液，使其终浓度为0.5μg/ml。
5、加样 取5 μl提取的植物DNA溶液与2μl 6×上样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。
6、电泳 加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60～80V，电流在40mA以上。
7、染色 未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的EB溶液中,室温下染色20～25分钟。
8、 观察和拍照 在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或以加有EB的电泳胶板，并绘区带电泳图制。
注意事项
1.大量提取液氮研磨时，应当快速转移，降低DNA的降解。
2.裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解。
3.各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。
4.取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰。
5.异丙醇,乙醇.NaAC,KAC等要预冷,以减少DNA的降解,促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀
6.溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性，要求在整个操作过程中必须带一次性手套。
