骨组织的免疫组化染色应采用什么方法？
在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。由于骨组织中60%以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏，使接下来的工作无法进行；这里介绍一种由袁永辉建立的EDTA低温脱钙法，可满足骨组织免疫组化染色的要求。
1.组织处理：取材骨组织投入到4%多聚甲醛中，4℃固定24~48小时。
2.脱钙处理：投入15% EDTA-2Na于4℃冰箱脱钙3周，每周换1次脱钙液，以细针刺人为脱钙终点。
3.后续操作：取出蒸馏水冲洗→梯度浓度乙醇脱水→石蜡包埋→切片→4μmSP法常规免疫组化染色。
4.结果判定：经EDTA低温脱钙后骨小梁结构保存完整，细胞因子IGF-1在骨细胞、成骨细胞及骨髓基质细胞胞质中都有表达，呈黄色丝状分布。
5.注意事项：
（1)固定剂宜选用甲醛或多聚甲醛，低温24小时以上。
（2)脱钙尽可能用最短的时间达到最佳的脱钙效果，但不能使用强酸。
（3)骨切片在4μm左右为佳，太厚也易造成脱片，太薄则骨结构难以完整显现。
（4)骨标本不宜高压修复，可直接行免疫组化染色。
（5)选用中性EDTA脱钙液，该液对组织形态结构和抗原都保存较好，而不能用强酸脱钙，脱钙温度最好在4℃冰箱内进行。
（6)脱钙程度以大头针能刺入脱钙骨组织而没有阻力为止。
推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
