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流式细胞术质量控制

2019.9.30

流式细胞术(flow cytometry,FCM)越来越广泛的应用在临床检验中。由于临床检验本身的性质,它要求临床检验的管理者和操作人员必须把好常规操作已经结果分析的质量关。同时还必须懂得如何判断分是在控还是失控。作为临床检验工作,其工作的质量标准就是使检验的结果最佳地符合病人有无病变的实际情况。

在临床检验中分为分析前、分析中、分析后的质量控制。分析前的质量控制主要内容是标本采集、保存和传送等;分析中的质量控制即实验操作过程的控制;分析后的质量控制主要是对数据结果的处理,对检验结果的可信度评价和及时将报告送给临床并听取反馈意见。

为此,从临床医师开出化验单,直至拿到检验报告的整个过程都在质量控制的范畴之中,即所谓全程质量控制。它包括质量保证、质量控制和质量评估。质量保证,指围绕所有的步骤,监测和评估实验室规章制度与操作流程的效力。主要利用质量控制和质量评估。

质量控制指建立一套完善的实验室监控方法,保证结果的可靠性,提高准确度、精密度、重复性和室间结果的可比性。对于一个实验,应建立一套包括各种可变因素(仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等)的操作规程

质量评估是由一个区域性的、国家的或国际性的机构,组织通过一系列的方法来比较实验室内或不同实验室之间的结果而建立的一套评价系统。其主要目的是建立室间和仪器设备之间的可比性。当一个标准品或参考标准存在时,质量评估通常被称为熟练度测试。因此,严格的质量控制是先进的临床检验分析技术真正发挥作用的保证。

FCM作为一项先进的检测技术,对质量控制自然也不例外。目前,FCM应用于临床检验的项目主要集中在几个方面:1,免疫表型分析,包括外周血淋巴细胞表型分析、白血病/淋巴瘤免疫分型、血小板膜糖蛋白分析、HLA-B27检测、阵发性血红蛋白尿(PNH)的检测等等。2,细胞DNA、RNA检测及细胞周期分析,包括DNA倍体检测、细胞周期分析、网织红细胞检测、网织血小板检测等等。3,定量分析,包括爱滋病划分中外周血CD4的绝对定量、OKT3治疗监测中CD3的绝对定量干细胞移植中的CD34的定量等等。FCM实验的质量控制自然也包括仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等整个实验过程的质控。

一、流式细胞仪的校准

流式细胞仪的校准包括流路的稳定性、光路的稳定性、多色标记荧光颜色补偿、光电倍增管转换的线性和稳定性。对仪器的校准主要是利用标准微球进行监测。聚苯乙烯可以被做成各种大小的微球,也可被荧光标记或者拥有定量免疫球蛋白的结合位点。这种制成固定荧光强度、大小和光散射性的聚苯乙烯微球,已成为流式质控中的一个常用的标准品。BECKMAN COULTER公司拥有仪器校准所需全部标准微球(见表一)。另外,在颜色补偿方面,BECKMAN COULTER公司的流式细胞仪除了可以用标准补偿试剂来完成外,还可以直接利用生物样品进行自动颜色补偿,这使多色标记变得非常容易。BECKMAN COULTER公司的流式细胞仪所带的全程质控软件,使日常仪器性能的质控以及质量控制评估都可自动完成。


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