大鼠肝星状细胞原代培养实验
胰酶消化法
| 实验方法原理 | 将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 |
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| 实验材料 | SD大鼠 |
| 试剂、试剂盒 | 戊巴比妥钠 小牛血清 DMEM 酶消化液 D-Hanks' 液 酚红 台盼兰 HBSS 氯化钠 PBS |
| 仪器、耗材 | 手术刀 手术剪 尼龙网 相差显微镜 荧光显微镜 |
| 实验步骤 |
一、实验材料准备 2. 试剂：戊巴比妥钠，小牛血清(或胎牛血清，则更好)，DMEM，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配)，18% Nycodenz(以GBSS配)，D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4·7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L，可加酚红 0.02 g/L)，HBSS，台盼兰等。 3. 器械：手术器械，200目尼龙网，相差显微镜，荧光显微镜。 二、原代培养方法 1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管，以D-Hanks'液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型胶原酶)。 三、传代方法 四、 结果 接种次日，光镜下可见细胞呈星芒状，胞质内有脂滴，荧光镜下328 nm处见自发荧光。附上发表于Biochem Biophys Res Commun 2004年文章的照片(图1)。 展开 |
| 注意事项 |
1. 进一步鉴别需要做免疫组化：Desmin和α-SMA；后者在细胞激活后才表达。
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| 其他 |
一、参考文献
1. 袁桃霞，张锦生，张月娥，等. 大鼠肝Ito细胞的体外培养及肝素对其抑制作用的观察. 上海医科大学学报 1996;23(2):90-93.
2. Huang GC, Zhang JS, Tang QQ. Involvement of C/EBP-α gene in in vitro activation of rat hepatic stellate cells. Biochem Biophys Res Commun 2004;324(4):1309-1318.
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