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olympus荧光显微镜的应用要点

2020.8.25

荧光显微镜是利用“光化荧光”成像,如果所选激发波长在肉眼所看不见的近紫外光区(320~400nm),荧光的发射光谱也较普通光镜光源的平均波长短,光学分辨率提高。高能量的光子与电子碰撞,使得电子从基态跃迁到激发态。激发态的电子很不稳定,会重新回落到基态,这个过程中会消耗部分热能,并发出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低,因此波长更长。由于新的光子波长区别于入射光的光子波长,通过一定的光学处理方法将两束不同波长的光分开,从而使我们只看到发射出来的新光子(荧光信号),也就是olympus荧光显微镜看到的荧光图像。

  olympus荧光显微镜的预检查和调节:

  (1)每次进行荧光观测前,必须例行检查荧光装置的灯丝对中、光路对焦、孔径光阑、视场光阑设置等状况。

  (2)所需要的荧光激发/发射滤光片组件是否已装在转换器中,olympus荧光显微镜物镜配置是否得当,除去物镜前透镜的油渍和灰尘。

  (3)如同时进行透射光相差观察,要检查聚光镜对中心及相差环与物镜相反的共轭情况。

  (4)检查样品载体(载玻片、盖玻片和其他器皿)有否挂有液体、灰尘,厚度是否在物镜标定的工作距离范围内。切片样品不能太厚,约≤10μm为宜。

  (5)因照明光源含有紫外线,在载物台前上方放一块棕色遮光板,以防紫外线损伤视网膜。

  (6)电压不稳会降低高压汞灯的使用寿命,光源电源加配稳压器。

  (7)为延长汞灯寿命,在开启后15min方可关闭;汞灯荧光电源一旦关闭,再次启动至少需等待10min,以使水银蒸汽冷却复至原态,否则会影响灯的寿命。

  olympus荧光显微镜的像观察:

  (1)在开启荧光灯源后约5~10min激发光强度趋于稳定,装载样品进行观察;为防止在调焦和寻找物像过程中过度激发光照会造成样品荧光淬灭,先通过缩小olympus荧光显微镜的孔径光阑或加ND滤光片将激发光调节到适度强度,有规律地移动样品台,待确定镜像后,在调节到荧光状态用于拍摄记录。

  (2)镜像质量不佳的调整。排除样品制备因素外,可进行的必要调节措施是:

  ①排除成像光路中的遮光或限光器件,如DIC附件、ND滤光片等。

  ②重新调节olympus荧光显微镜的收光器对焦和孔径光阑大小。

  ③细心调节olympus荧光显微镜物镜覆盖差校正环。




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