荧光素酶的测定
实验方法原理
荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。
荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋光
光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的
式中，H 是 Planck 常量；v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低（［ATP］＜＜Km）时，Michaelis-Menten 等式就可以简化成：
I＝常量 ×［ATP］
常量＝Ｖ/Km。光密度与 [ATP] 成正比。
实验材料 荧光素酶
试剂、试剂盒 Tris-乙酸ATPMgSO4荧光素
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
开始加入 0.01 ml ATP
10 s 后（25℃）读光密度值（562 nm 处的放射最大值）。利用在 0.05～0.5 umol/L 之间的 ATP 制作标准曲线。
一个酶单位被定义为，在 25℃ 甘氨酸-Tris pH 7.6 溶液中，含 5 pmol ATP 及 7.5 nmol荧光素的 50 ul 实验混合物所测量到的光输出。一个光输出单位产生一个生物计最高峰相当于在 PPO/POPOP 鸡尾酒中 14C 的 0.02 uCi（1991 年以前，1 个单位是指 pH 7.7、25℃ 时，存在 0.6 mmol/L ATP 和 0.1 mmol/L D-荧光素的条件下，每分钟能产生 1 nmol 焦磷酸的荧光素的量）。
注意事项
其他
试剂
0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75
10 mol/L ATP（二钠盐，三水合物，Mr＝605.2；准备 10 mmol/L 60.5 mg 溶于 10 ml 溶液并且稀释 10 ul 于 10 ml 水中）
0.1 mol/L MgSO4（MgSO4·7H2O，Mr＝246.5；246 mg 溶于 10 ml 水中）
1 mol/L 荧光素（4，5-二氢-［6-羟基-2-苯噻唑］-4-噻唑酸，Mr＝280.3；钠盐，Mr＝302.3；3 mg 溶于10 ml 0.1 mol/L Tris-乙酸 pH 7.75， 储存于 -20℃）。
荧光素酶（提取于萤火虫，1 ug/ml溶于 0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75）
