SDS法分离植物DNA
实验概要
Dellaporta，Wood 和 Hicks (1983) 法分离植物总基因组DNA，通过实验掌握SDS法从植物叶片提取DNA 的原理和方法。
主要试剂
提取缓冲液 [ 详细信息：100mM Tris.Cl,；50mM EDTA； 500mM Nacl；40mmol/L 巯基乙醇，随用随加。]
液氮
异丙醇
TE缓冲液
无水乙醇
70%乙醇
KAC [ 详细信息： 5mol/L KAC。]
主要设备
移液器
冷冻高速离心机
台式高速离心机
水浴锅
陶瓷研钵
离心管 [ 详细信息：离心管，50ml，有盖。]
离心管 [ 详细信息：离心管，5ml 和 1.5ml规格。]
小玻棒 [ 详细信息：小玻棒，弯成钩状的。]
实验步骤
1. 将2g经去淀粉处理的新鲜植物组织置于液氮中速冻,用研钵磨成细粉.
2. 将冷冻粉末转移至一50mL 离心管中并加入15mL提取缓冲液。轻轻旋转混匀。
3. 加入1mL 20% SDS，混匀，65°C保温10min 并不时轻轻旋转混匀（要点1）。
4. 加入5mL 5mol/L KAC，混匀后冰上放置20-30min（要点2）。
5. 25000g，4°C离心20min。
6. 上清用双层Miracloth纱布过滤，转移至一干净的50mL离心管中，加入10mL异丙醇，轻轻颠倒混匀，-20°C放置40min沉淀核酸。
7. 2000 g，4°C 离心20min，去上清，晾干沉淀5min。
8. 用700uL 50TE 缓冲液溶解沉淀并转移至一 Eppendorf 管中（要点3）。
9. 加入7uL RNase A 贮液，37°C保温1h。
10. 加入75 uL 3mol/L KAc，轻弹混匀，离心15 min沉淀不溶性杂质。
11. 将上清转移至一装有500uL 异丙醇的干净管中，轻轻混匀，室温下放置5min。
12. 微量离心机离心15min沉淀DNA，去上清并用500uL 70%乙醇清洗沉淀。再次离心5min，用巴斯德玻璃吸管吸去乙醇。
13. 沉淀物溶解于200uL TE 缓冲液中，4°C保存。
注意事项
1. 将SDS溶液加入到化冻的提取物中时，可能会有沉淀析出，要保证析出的SDS重新溶解，以及 65°C保温时提取物混合均匀。
2. 在高浓度（>1 mol/L)的钾离子存在的情况下，十二烷基磺酸钠(SDS)会与蛋白或多糖结合变成不溶性的十二烷基磺酸钾复合物，这类复合物通常呈絮状，必须要经较高转速离心和Miracloth纱布过滤予以去除。
3. 若沉淀难于重新溶解，可在65°C加热10min。
