什么是重组PCR？
重组 PCR(recombinant PCR,R-PCR)可用 PCR 法在 DNA 片段上进行定点突变,突变的产物(即扩增物)中含有与模板核苷酸序列相异的碱基,用 PCR 介导产生核苷酸的突变包括碱基替代、缺失或插入等。
如图1所示,重组 PCR 操作需要2对引物:“左方”PCR 的一对引物为 a 和 b',b' 中含有一个“突变碱基”;“右方”PCR 的一对引物为 b 和 c,b 中含有一个和引物 b' 中的“突变碱基”相互补的碱基。先用2对引物分别对模板进行扩增。除去引物后将2种扩增产物混合,变性并复性后进行延伸,然后再加入外侧引物 a 和c,经常规的 PCR 循环后,便能得到中间部位发生特定突变的 DNA 片段。重组 PCR 造成 DNA 片段的插入或缺失与其造成特定碱基的置换在操作上类似。重组 PCR 可制备克隆突变体,用作研究基因的功能。
图1 重组 PCR 造成特定碱基置换示意图
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