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脂肪酶的活性测定方法介绍

2022.9.16

方法:

⒈粗酶液的制备

用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

⒉实验设计

本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。

⒊酸价的测定

酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数, 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价, 参照文献[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 摇匀, 终止反应, 并加入2滴酚酞指示剂, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色, 在30 s内不消失为终点, 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V)。用同样的方法测定空白值, 每个试验重复两次, 以平均值作为测定结果。

酸价按下式计算:

X = C (V - V0) ×40 /M

式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)

C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)

M —试样的质量(g)

40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)

4 粗脂肪酶活力的测定

在最佳水解条件下, 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 , 根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1为粗脂肪酶活力, U为标准脂肪酶活力。

5标准脂肪酶液的配制

根据实验最佳条件, 配制标准脂肪酶液。一篇相关文献 粗脂肪酶活力的测定方法的研究.pdf

答:实验设计,本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。用色拉油作底物不太妥,一般是用橄榄油,化学纯的。


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