带你走出HPLC和UHPLC色谱柱的十大误区（二）
误区6 UHPLC填料柱比常见的HPLC填料柱更容易堵塞
随着柱填料多孔材料粒径的不断减小，使得柱的主要硬件设计跟着一起发生变化。对于sub-2μm UHPLC柱的堵塞，是样品和流动相物质倒伏在柱入口的结果。如果你在进样前对样品进行了净化，如使用固相萃取、过滤或离心等，就可以避开任何污染问题。
误区7 保护柱是没必要的
使用保护柱有很多好处。首先，保护柱可以防止化学物质或颗粒物损坏分析柱。其次，相较之更换一根昂贵的分析柱，更换一根5mm 的保护柱只需要很少的花费。现代的保护柱具有几乎无死体积、更换快速，以及适用于UHPLC的高压等优点。
误区8 你不可以将HPLC色谱柱反接以便于冲洗掉其中的颗粒物
实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多（通常会高2倍）。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂，并且分配一定的时间使柱床稳定，一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。
液相色谱柱上基本都有->标志，表示流动相的流动方向，有的在色谱柱上印有“Nerver Lot Flow in the Opposite Direction”字样，翻译成“决不能反冲”的意思，色谱柱可以反冲吗、色谱柱能不能反冲的问题争议很大，但在我们工作中，用色谱柱反冲技术修复色谱柱可以收到柱效提高、柱效恢复的效果。
一、分析氨基酸的离子交换柱，使用一段时间反柱效明显下降，用NaOH活化，达不到要求，但用NaOH反冲活化可迅速恢复柱效。
二、色谱柱使用一段时间后柱效下降，此时可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填满，然后用流动相反冲一下，可使柱效恢复，因反冲可以改善柱头死空间。
三、因反冲可把沉积在过渡板上的细微颗粒冲走，有时也可用反冲技术使柱压降低。
反向使用色谱柱有一个例外，就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况，反向使用可能会将填料从柱床冲出。如果制造商在柱的入口处使用的是高孔隙率的玻璃料，那么将柱反冲的话，可能会将柱填料从填充床上冲洗掉。
色谱柱在工厂填装时，出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如，色谱填料平均粒径是5μm，粒径分布范围是3-7μm，出口端筛板孔径必须小于3μm，使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。
大多数生产厂家选择的筛板孔径是2μm。 至于某些厂家两端的柱筛板孔径不一样，一般是进样端大些，出样端小些。因此，一些制造商会在柱子标签处放置一个箭头指示，表明必须仅在一个方向上使用。可以肯定有这种可能性，所以一个色谱工作者应该好好阅读色谱柱手册或说明书，或与制造商确定这根色谱柱是否可以反冲。
误区9 色谱柱填料粒径越小、压力越高，分离效果越好
超小的粒径以及超高的柱压，并不一定是色谱工作者的最佳选择！现代色谱柱的柱特性研究已经引发出一些新方法来评估一根色谱柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色谱柱，其柱效与sub-2μm UHPLC柱效一样好，然而与常规的LC填料色谱柱比起来，柱压很低。
误区10 柱压不会影响色谱分离效果
色谱的很多参数都是受柱压影响的，包括部分溶质的摩尔体积、停滞体积、柱孔隙度、保留因子、流动相密度、介电常数、固定相结构、pH值和电离常数等。为什么柱压引起了越来越多的关注呢？原因是市售的色谱仪很多是超高压色谱仪和色谱柱。
当色谱柱在约2000psi（13.789MPa）压力下运行时，即使保留时间上存在小差异，也并不会引起我们的注意；特别是如果重复性较好及定量不受影响的时候。但是，当柱压接近2000psi（13.789MPa）时，柱压的影响可能就相当明显了。
