如何选择符合您需求的HPLC或UHPLC色谱柱?(二)
图3给出了键合相选择能力的另一实例。
一个分离是用C18键合相的UHPLC色谱柱完成,另一个分离是用C18-PFP键合相的UHPLC色谱柱完成。
C18-PFP键合相提供的额外分离机制,使得总体分离效果更佳出色。
图 3:ACE Excel可以获得卓越的分离度和峰形:药物及其相关物质的UHPLC结果
条件
色谱柱尺寸:50 x 2.1mm
流动相:
A = 5mM甲酸(溶于水中)
B = 5mM甲酸(溶于甲醇中)
梯度:5分钟内从3至100%B
流速:0.6 mL/min
温度:40 ℃
检测:UV 254 nm
样品
对乙酰氨基酚
2. 氢氯噻嗪
3. 甲基苯基亚砜
4. 甲基苯砜
在C18 UHPLC色谱柱和C18-PFP色谱柱上同样快速地产生色谱图。
然而,C18-PFP色谱柱可以为色谱峰对(13,14)和(15,17)提供更佳的选择性,因此能够提供优越的总体分离性能。
2.ACE和ACE Excel硅胶基质固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响,并且在为碱性化合物提供卓越峰形方面赢得了口碑。
峰拖尾可以降低分离度,降低灵敏度,甚至干扰准确度和精密度(图4)。
峰拖尾有许多潜在的原因,但分离碱性物质时的主要原因是硅胶固定相载体颗粒表面上的酸性硅醇基与分析物上的氨基之间的相互作用(图5)。
图 4:峰拖尾对分离度和灵敏度的影响
随着峰拖尾(Tf,拖尾因子)从1.0增加到2.0,分离度(Rs)从1.5下降到0.87。
由于峰宽增加以及峰面积保持不变,灵敏度(峰高)也随着峰拖尾的增加而下降。
ACE色谱柱采用具有极低硅醇活性的超惰性硅胶制成。
这种超纯硅胶采用ZL技术进行有效键合和彻底封尾。
导致这种硅胶基质的固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响。
ACE色谱柱的超惰性特性使其成为分离极性碱性化合物的理想选择。
当分离复杂碱性化合物时,与其他现代碱性去活色谱柱相比,ACE色谱柱总是能给出明显更好的峰形和柱效(图6)。
图 5:峰拖尾相互作用
硅胶固定相载体表面上的酸性硅醇基可形成与碱性化合物相互作用的离子交换位点。
这种离子交换的相互作用通常可以导致峰保留(二次保留),并当采用反相HPLC分离胺类化合物时引起峰拖尾。
一种几乎消除了硅醇基对色谱分离不利影响的硅胶基质固定相
图 6:峰拖尾比较
条件
色谱柱尺寸:50 x 2.1 mm
流动相:40%甲醇,60%水
流速:0.2 mL/min
温度:22ºC
样品:吡啶
报告了碱性化合物(吡啶)在各种常见C18色谱柱上的塔板数。
在10%峰高下测量塔板数,以使峰拖尾纳入在测量中。
ACE C18-PFP由于其超惰性性质而达到了最高塔板数。