荧光物质的效率、强度、光谱与稳定性特性
荧光物质的效率、强度、光谱与稳定性特性
荧光物质(fluorescentmaterial)又称为荧光素(fluorescein或luciferin)、荧光色素或荧光探针，是指能够吸收光并能在较短时间内发射荧光，而且能作为染料的化合物。荧光素通常具有芳香环结构。
(1)荧光效率：荧光色素能发出荧光，除具备合适的能量外，还须具备高荧光效率。荧光效率(fluorescence efficiency)即荧光量子产率，是指荧光物质吸收光后发射出的荧光光量子数与其所吸收激发光光量子数之比。
即 荧光效率=发射荧光的光量子数÷吸收光的光量子数
荧光量子产率数值反映了荧光物质将吸收的光能转化为荧光的效率，其数值越大。该物质的荧光越强，用于荧光分析的荧光物质荧光量子产率数值要求达到0．35以上。大部分物质没有发射荧光的性质，即使是荧光色素也不能将吸收的全部光转变为荧光，而是在发射荧光的同时，或多或少地以其他形式释放其所吸收的光能：因此，在通常情况下，荧光量子产率数值总是小于1。
(2)荧光强度：荧光强度(fluorescence intensity)是指荧光色素发射荧光的光量子数，决定荧光色素检测的灵敏度。在一定范围内，激发光越强．荧光也越强，即荧光强度等于吸收光强度乘以荧光效率。所以，选用适当强度的光源作为激发光源和选用适合于被检荧光物质选择性吸收的光谱滤片作为激发滤片，是提高荧光强度的根本方法。
(3)荧光物质的吸收光谱和发射光谱：每种荧光物质的吸收光不仅有一定波长。而且在各波长上的吸收量也不同，从而构成特殊的吸收光谱曲线；发射荧光的情况也是如此。因此，荧光物质在一定条件下有一定的吸收光谱(激发光谱)和发射光谱(荧光光谱)，如吖啶橙的吸收光谱(最大吸收波长)是455nm，其发射波长光谱为450～700nm。因此，吖啶橙与不同细胞成分结合后。可产生橙、黄、红、绿等荧光。了解各种荧光染料的吸收光谱和发射光谱，有利于在观察被检标本时，有效地选择适当的滤片，获得最好的荧光效果。
(4)荧光稳定性：提高激发光强度固然可以提高荧光强度，但激发光强度不可能无限提高。因为激发光强度超过一定限度时光吸收趋于饱和，而且不可逆地破坏激发态分子，这种现象称光漂白。对于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜而言，如光源长时间照射样品。可导致光漂白现象，严重影响检测。解决光漂白问题最直接的方法：一是降低光照强度，二是使用抗淬灭剂(anti-fade reagent)。
