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Elisa方法中的竞争法与夹心法的区别

2021.12.09

1、检测范围不同

竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原;夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

2、检测原理不同

竞争法的检测原理为:受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比;

夹心法的检测原理为:将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体,只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。

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3、检测步骤不同

运用竞争法检测的操作步骤为:

(1)将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体,洗涤;

(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量,洗涤;

(3)加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原最多,故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多;

(4)通过方波伏安法,检测培养体系的峰电流,通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。

运用夹心法检测的操作步骤为:

(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质;

(2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质;

(3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关;

(4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。


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