常用的细胞转染方法
转染是将外源性基因导入细胞内的一种技术,是实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类:瞬时转染和稳定转染(永久转染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析;后者外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体存在,外源DNA整合到染色体中概率很小,通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
转染大致包括物理、化学和生物介导的三类途径:
1、物理法—电穿孔、显微注射和基因枪法等;
2、化学法—磷酸钙共沉淀、脂质体转染和多种阳离子物质介导的技术等;
3、生物法—原生质体转染和由病毒介导的转染技术等。
常见的转染方法及比较
转染方法 | 原理 | 应用 | 特点 |
磷酸钙法 | 磷酸钙DNA复合物吸附在细胞膜上,被细胞内吞 | 稳定转染 瞬时性转染 | 不适用于原代细胞, 操作简便但重复性差 ,有些细胞不适用 |
DEAE-右旋糖苷法 | 带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸中带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 | 瞬时性转染 | 相对简便、结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用 |
电穿孔法 | 高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入细胞 | 稳定转染 瞬时性转染 | 适用性广但细胞致死率高;DNA和细胞用量大, 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件 |
病毒介导法 | 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 稳定转染瞬时转染 | 可用于难转染的细胞、原代细胞、体内细胞等 |
阳离子脂质体法 | 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞 | 稳定转染瞬时转染 | 适用性广,转染效率高,重复性好,转染效果随细胞类型变化大 |
基因枪法 | 将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞 | 瞬时性转染 | 可用于人的表皮细胞、纤维原细胞、淋巴细胞系以及原代细胞 |
显微注射法 | 用显微操作将DNA直接注入靶细胞核 | 稳定转染 瞬时转染 | 转染细胞数有限 ,多用于工程改造或转基因、动物的胚胎细胞 |
山东维真生物科技有限公司可为您提供腺病毒、慢病毒及腺相关病毒(AAV)的质粒设计、载体构建、病毒包装、细胞系建立至表达分析的全套服务。如果您有需求,欢迎致电垂询(400-0772566)或添加微信客服(13012994257)。关注微信公众号“维真生物”,了解更多产品/服务或活动详情!
推荐