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3-磷酸甘油酸激酶的测定实验

2019.3.31
实验材料

酶样品

试剂、试剂盒

三乙醇胺-NaOH3-磷酸甘油酸ATPNADHEDTA硫酸镁3-磷酸甘油酸激酶GAPDH

仪器、耗材

分光光度计

实验步骤


0.98 ml 实验混合物


0.02 ml 酶样品


25 ℃ 时于 340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

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注意事项
其他

试剂:


0.1 mol/L 三乙醇胺-NaOH,pH 7.6(三乙醇胺-HCl,Mr=185.7;溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中,用 1 mol/L NaOH 调至 pH 7.6,补充到 1 L)


0.1 mol/L 3-磷酸甘油酸(3-磷酸甘油酸,二钠盐,Mr=230.0;230 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)


0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L 硫酸镁(MgSO4·7H2O,Mr=246.5;247 mg 溶于 10 ml 水中)


3-磷酸甘油酸激酶,来源于酵母(约 2000 U/mg)


GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶来源于兔肌肉,800 U/ml)

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