吉姆萨染色实验
实验方法原理 | 吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境里正电荷增多,易和伊红结合,染色为偏红;在偏碱性环境里负电荷增多,易和美蓝或天青结合,染色偏蓝。 |
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实验材料 | 原位杂交玻片 |
试剂、试剂盒 | 吉姆萨染色液 磷酸钠缓冲液 乙醇 二甲苯 |
仪器、耗材 | 染色盘 培养箱 滤纸 |
实验步骤 |
1. 将显影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盘中。
3. 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s(依染色时间决定染色的强弱),将玻片在水中浸泡3次,每次2 min。
5. 在通风橱中,按如下操作压片固定:用一平头镊(拿在左手),从二甲苯中取出一块玻片,夹住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所处位置),左手拿一干净的盖玻片,很缓慢地放在载玻片上(在加压片固定介质和盖玻片前,勿使玻片变干,因微小气泡会造成人为假象)。
6. 用3MM 滤纸,沿盖玻片边缘,小心吸去多余固片介质/二甲苯,并擦拭载玻片背面(勿擦拭盖玻片)。
7. 将玻片平放于一硬纸盒盘上,置42℃温孵箱2天使之凝固。
8. 以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳,染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒,必要时,载玻片上再注明标签。
展开 |
注意事项 |
1. 勿将玻片直立存放于玻片中,因此时固片介质尚未凝结。 2. 细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片一定清洁,要无酸碱污染。 3. 配制顼特液一定用优质甲醇,稀释染色一定用缓冲液,冲洗一定用水应近中性,不然可导致各种细胞染色反应异常,以致于识别困难,甚至造成错误的。
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其他 |
染色实验与染色浓度,细胞的多少,室温有关,染液淡,温度低,细胞多则染色时间较长,反之,可减少时间,必要时可增加染液量或增加时间。冲洗前,需要在低倍显微镜下观察染色是否核质分明,是否染色清楚。
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