介绍蛋白酶K的使用方法
蛋白酶K(ProteinaseK)，来源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber）的蛋白酶K基因，属于丝氨酸蛋白酶类，具有极高的酶活性和广泛的底物特异性。
蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的样品处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，能增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。
介绍蛋白酶K的使用方法：
1.配制蛋白酶K溶液：一般以20mg/ml浓度配制蛋白酶K溶液。将200mg的蛋白酶K加入到9.5mldd水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
2.根据终浓度50—100µg/ml，吸取适量蛋白酶K溶液，到待消化样品中，孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。推荐反应缓冲液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2。
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