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由 MBS 将半乳糖苷酶与抗体的结合实验

2019.3.30
实验材料

抗体β-半乳糖苷酶

试剂、试剂盒

MBS 溶液MgCl2NaCl 2-巯基乙醇二硫丁四醇

仪器、耗材

交联葡聚糖 G-25 色谱柱

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


在 1 ml 抗体溶液中加入 1 ul MBS 溶液,25℃ 放置 1 h。未结合试剂由交联葡聚糖 G-25 色谱柱除去,用缓冲液洗脱。立刻在收集的蛋白质组分(280 nm 下测定吸收值)中加入 2 mg β-半乳糖苷酶,30℃ 下放置 1h。用 50 ul/ml 0.1 mol/L 二硫丁四醇停止反应。

注意事项
其他


试剂:


MBS 溶液(3-来酰亚胺基苯酰-N-羟基丁二酰亚胺酯,Mr=314.3;20 mg/ml 二氧六环)


抗体溶液(IgG,1 mg/ml 溶于 0.05 mol/L NaCl,0.1 mol/L 磷酸二氢钾 pH 7.0)


β-半乳糖苷酶(来自 E.coli)


交联葡聚糖 G-25 色谱柱,约 1 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氢钾平衡


10 mmol/L MgCl2,50 mmol/L NaCl


1 mol/L 2-巯基乙醇(Mr=78.1;0.78 g/10 ml)


0.1 mol/L 二硫丁四醇,(DTE,Mr=154.2,154 mg/10 ml)

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