干扰素生物学活性检测
| 实验方法原理 | 干扰素能刺激某些指示细胞（如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞）产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒（VSV）的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN，每个稀释度设3 孔，每孔50 μl，病毒对照不加IFN
2. 每孔加入100 μl 1.5～2×105 /ml Wish或Hep-2细胞悬液，37℃、CO2孵箱培养6～12 h，使细胞贴壁为单层
3. 每孔加入50 μl含100个TCID50 VSV，细胞对照不加病毒液
4. 根据细胞病变状态，终止培养前3～4 h，加入5 mg/ml MTT，15 μL/孔
5. 加入适量生理盐水，用滴管轻轻吹吸弃去悬浮病变细胞和死细胞
6. 200 μl/孔 二甲亚砜（DMSO），作用10 min
7. 测OD（570nm），表示活细胞中含甲 的量，也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法测定IFN对活细胞的保护水平
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| 注意事项 | 1. 实验时先加IFN，后加指示细胞，以使细胞均匀分布于培养板底部。 |
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