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pcr退火温度一般为多少

2021.8.12

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际。PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR。其中,模板的GC含量、模板的组成(单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么)等等条件都会影响tm值。没有一个确定的说是多少比较好,都是具体情况具体分析。有的时候引物设计回来,还要做温度梯度测验,设计的tm不一定就是最适合的tm。不得不说这题直接问一个数,纯属是闭门造车,一点实验经历都没有只凭空想,答对了也没有得到任何有用的知识。 好了,如果非要说一个数的话,那么习惯上是55度左右。选项中我更倾向于56度的答案。50度还是偏低,对于稍微复杂的模板来说,非特异性扩增的可能性会增大。我只能说,以我6年分子生物学实验的经验和实验室同行的引物设计习惯来说,一般是55度左右。对于这样的题,不必过于纠结,没什么意义。

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