PCR反应技术的特点
1、特异性强
决定 PCR 反应特异性的因素有:①引物与模板 DNA 特异分子的正确结合;②碱基配对原则;③ Taq DNA 聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键,它取决于所设计引物的特异性及退火温度。在引物确定的条件下,PCR 退火温度越高,扩增的特异性越好。Taq DNA 聚合酶的耐高温性质使反应中引物能在较高的温度下与模板退火,从而大大增加 PCR 反应的特异性。
2、灵敏度高
从 PCR 的原理可知,PCR 产物的生成是以指数形式增加的,即使按75%的扩增效率计算,单拷贝基因经25次循环后,其基因拷贝数也在一百万倍以上,即可将极微量(皮克级)DNA 扩增到紫外光下可见的水平(微克级)。
3、简便快速
现已有多种类型的 PCR 自动扩增仪,只需把反应体系按一定比例混合,置于仪器上,反应便会按所输入的程序进行,整个 PCR 反应在数小时内就可完成。扩增产物的检测也比较简单:可用电泳分析,不用同位素,无放射性污染,易推广。
4、对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总 RNA 均可作为扩增模板。可直接用各种生物标本(如血液、体腔液、毛发、细胞、活组织等)的 DNA 粗制品扩增检测。
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