实验室分析仪器--全自动生化分析仪检测方法
1终点法又称为平衡法,是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法,有一点终点法和两点终点法两类。一点终点法的特点是使用一种或两种试剂,当待测物与试剂反应达到终点时,测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度,该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等,手工操作的大多数方法都是一点终点法。两点终点法也称固定时间法,如果是单试剂分析,当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时,通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰,其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1,一定时间后再读取A2,然后比较标准和测定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待测物的浓度。肌酐法就是一个典型的单试剂两点法的例子。如果是双试剂分析,选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外,还可消除内源性干扰物质的干扰,其分析过程是加入试剂1后读取A1,加入试剂2后读取A2,A1相当于读出样品空白值,A2才是实际呈色反应,然后比较标准和测定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待测物的浓度。为了提高终点法检测的准确性,选择该法时应设置终点法零点读数、样品空白等两个分析参数,前者是在反应前即开始读数,可以扣除反应前试剂和样品混合液的空白读数;后者是样品加空白试剂所得到的吸光度,反应需要占用一个比色杯。
2连续监测法又称动态分析法、速率法等,基本原理是在酶促反应的最适条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)内连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。具体方法有两点速率法和多点速率法:两点速率法是通过观察在零级反应期内两个时间点的吸光度,用两个点的吸光度的差值(ΔA)除以时间(分),计算出每分钟的吸光度变化值;多点速率法是在零级反应期内每隔一定时间(2-30s)进行一次监测,连续监测多次,求出单位时间内的反应速度,这种方法又可分为最小二乘法、多点δ法、回归法、带速率时间法等。该法具有明显的优点就是大大提高了分析速度和准确性,主要适用于酶活性及其代谢产物的测定。在连续监测法过程中,即使不加样品,试剂中的底物也会自动降解得到一个结果,因此应设置试剂空白速率,不同批号试剂的试剂空白速率不一样,其值为以水代样品测得的项目结果,样品测定结果应扣除试剂空白速率的数值。
3比浊法自动生化分析仪一般只能做透射免疫比浊分析,当光线通过一定体积的含免疫复合物的溶液时,由于溶液中存在的抗原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光的减少,测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。它常用于终点法测定,目前主要用于血清特种蛋白的检测,如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。但是如果样品中待测抗原浓度过高,抗原与抗体形成的免疫复合物分子将会变小,而且易发生解离,使浊度反而下降,因此免疫比浊分析过程中必须设置前区检查,比较分析过程中后两个读数点的差别,如果后一点比前一点的吸光度低,则表示抗原已过剩,应将样品稀释后重测。
