关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

蛋白质除盐的方法有哪几种

2022.11.21

蛋白质除盐的方法有哪些?如何做能够在除盐的过程中不过分的稀释蛋白质?

答题思路:

首先,当遇到分离纯化题目的时候,我们脑海中先归纳出分离纯化的各种方法以及依据。

根据分子大小不同:透析、超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤、SDS-PAGE凝胶电泳。

根据溶解度差别:等电点沉淀、盐溶、盐析、有机溶剂分离沉淀。

根据电荷不同:各种电泳、离子交换层析

选择性吸附和利用对配体特异亲和力的纯法方法:亲和层析。

显然,蛋白质脱盐,是将蛋白质与小分子物质分开。上面的方法中,根据溶解度差别这几种方法还得加盐,与脱盐的目的背道而驰。这里面的等电点沉淀能不能行呢?如果原先蛋白质溶液中没有盐,那么我们将pH调整到某个蛋白质等电点,这种蛋白质就可能沉淀下来这时候肯定没有加盐。但是我们现在的体系中是有盐离子的,我们把盐析下来的蛋白质先加少量水溶解出来,这个时候我觉得因为溶液里有盐离子,溶剂的极性比较高,有一定盐溶的效果,所以等电点沉淀并不容易实现。

根据电荷的方法也不应该考虑,因为盐和蛋白质都是带电荷的,不好分离。

应该重点考虑根据分子大小不同的纯化方法。

透析能够分离蛋白质与离子,但是透析的过程中透析液会进入蛋白样品中,造成蛋白质的稀释。

凝胶过滤我们设置凝胶颗粒空隙小于蛋白质直径,这样蛋白质不经过凝胶内部首先被洗脱下来,而离子则进入凝胶颗粒内部。但是在洗脱的过程中蛋白质样品必然会被洗脱液稀释

推荐
关闭