杂交瘤技术基本程序与方法-2
2、细胞融合
（1）主要试剂的配制
①细胞培养基杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640或DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配制方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um），分装，4℃保存。
•不完全RPMI-1640培养基：RPMI-1640培养基原液96ml
100×L.G.溶液1ml
双抗溶液1ml
7.5% NaHCO3溶液1-2ml
HEPES溶液1ml
•不完全DMEM培养基：DMEM 13.37g
超纯水或四蒸水980ml
NaHCO3 3.7g
双抗溶液10ml
100×L.G.溶液10ml
用1N HCl调试PH至7.2-7.4，过滤除菌，分装4℃保存。
•完全RPMI-1640或DMEM培养基：不完全RPMI-1640或DMEM培养基80ml
小牛血清15-20ml
用于骨髓瘤细胞SP2/0和建株后的杂交瘤细胞培养。
•HT培养基：完全RPMI-1640或DMEM培养基99ml
HT贮存液1ml
•HAT培养基：完全RPMI-1640或DMEM培养基98ml
HT贮存液1ml
A贮存液1ml
②氨基喋呤（A）贮存液（100×，4×10-5mol/L）
称取1.76mg氨基喋呤（Aminopterin MW 440.4），溶于90ml超纯水或四蒸水中，滴加1mol/L NaOH 0.5ml中和，再补加超纯水或四蒸水至100ml。过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），-20℃保存。
③次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）贮存液（100×，H：10-2mol/L，T：1.6×10-3mol/L）
称取136.1mg次黄嘌呤（Hypoxanthine，MW 136.1）和38.8mg胸腺嘧啶核苷（Thymidine，MW
242.2），加超纯水或四蒸水至100ml，置45-50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），-20℃冻存。用前可置37℃加温助溶。
④L-谷氨酰胺（L.G.）溶液（100×，0.2mol/L）
称取2.92g L-谷氨酰胺（L-glutamine，MW 146.15），用100ml不完全培养液或超纯水（或四蒸水）溶解，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。
⑤青、链霉素（双抗）溶液（100×）
取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g，溶于100ml灭菌超纯水或四蒸水中，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。
