实验过程中Annexin V染不上色或阳性率偏低问题
• 确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。
• 贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟PS 的结合需要Ca2+离子，结合液中含有Ca2+，EDTA 的消化会影响染色，建议使用无EDTA 的胰酶，或者消化后用PBS洗涤干净。
• 细胞离心用冷PBS 洗涤后，应尽量吸干残余液体，残余过多的PBS 中含有磷酸根，会形成磷酸钙沉淀，影响Annexin V的染色。
• Annexin V结合液瓶盖要盖紧密封，长时间暴露于空气后，空气中的CO2 进入后形成CaCO3 会产生沉淀，从而减少游离的Ca2+，导致实验的结果不佳。
• 污染其他的缓冲液。如吸取PBS后不更换Tip 头会导致游离的Ca2+的减少，从而导致实验的结果不佳。
• 阳性细胞的丢失。如果是贴壁细胞，药物诱导后漂浮的细胞要收集起来合并检测，这部分细胞往往是凋亡阳性的细胞，丢弃会造成阳性结果偏低。
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