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荧光偏振技术的原理简介

2022.2.19

  将磷酸化底物进行荧光标记,蛋白激酶产生的磷酸化产物不进行荧光标记。让两种磷酸化产物与抗丝氨酸抗体(丝氨酸和苏氨酸是最常见的磷酸化位点,因为其结构末端含有羟基,羟基很活泼,可以与磷酸基团结合)相竞争结合。当反应液中没有蛋白激酶产生的磷酸化产物时,荧光标记的磷酸化物与抗体相结合形成复合体,由于复合体较大,运动速率相对较小,受偏振光激发后产生的激发光具有较大的偏振值;当反应液中含有蛋白激酶产生的磷酸化产物时,因二者竞争抗体的结合位点,结合到抗体上的荧光标记物较少,游离的荧光标记物在反应液中很多,发出的激发光偏振值减小。当蛋白激酶的活性越强,产生的磷酸化产物也就越多,与荧光标记物的竞争越激烈,对标记物产生的激发光的性质影响越大,因此偏振的改变直接与蛋白激酶的活性相关。利用这一原理可以检测蛋白激酶活性。

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