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胚胎操作中的注意事项

2019.4.23

实验概要

在胚胎学实验中,取卵与移植是很关键而重要的步骤,本Protocol的目的是向广大的实验人员提供一些心得体会,以利于大家以后的研究工作。

实验步骤

1.取卵原则:

1)   尽量缩短体外操作的时间——缩短杀鼠时间;取卵巢时无需放入去核液滴中,以加快操作速度;

2)   尽量减少操作中对卵的损伤——准备多根粗细不同的口吸管进行消化;据酶的浓度及活力,将消化时间固定在最适值;为防止操作液渗透压的改变,在使用之前盖上皿盖。

2.取卵后,将卵放入培养箱中培育15min,再进行显微操作。(刚从输卵管中取出并处理过的乱较脆弱。)

3.将卵或胚胎移入不同液体中时,应提前吸入一段欲移入的液体再移出卵,待将卵移入新滴后可见对流的出现,应及时将带入的液体吸出,以维持液滴的成分及渗透压。

4.胚胎移植:

原则:由于输卵管/子宫处于可自我调节的内环境中,相较之下,对胚胎的保护意识应更甚于输卵管/子宫。

1)   在固定好输卵管/子宫的位置之后,再从培养箱中取出胚胎,尽量缩短其在操作液中的时间;

2)   用于清洗胚胎的操作液滴量为1m L (有利于减少蒸发引起的渗透压改变);

3)   清洗胚胎时,注意上述第3点,以维持操作环境不变。

4)   提前准备两套口吸管,一套用于将卵从培养滴中移入操作液中,另一套用于将胚胎移入输卵管/子宫(此套必须保证清洁,避免移植时胚胎在管中堵塞)。

5.注意石蜡油的存放,若出现气味异常应及时更换。


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