一级菌种的分离、转管和培养实验
一、实验目的
1．了解一级菌种分离方法；
2．掌握一级菌种分离、转管的无菌操作规程；
3．学会子实体组织分离和菌褶抹孢分离的具体操作步骤；
4．学会一级菌种培养的关键技术。
二、实验设备、工具和材料
1．设备接种箱或接种室、恒温箱等。
2．工具接种针（接种钩、接种环）、接种耙、不锈钢镊子、手术刀、酒精灯、火柴、无菌培养皿、玻璃烧杯等。
3．材料平菇、香菇或滑子菇新鲜的子实体、斜面菌种、斜面培养基、无菌水、75%酒精棉球、可燃烧酒精等。
三、实验步骤
1．子实体组织分离法
①将接种工具和除了种菇、斜面菌种以外的实验材料预先移进接种箱（室）内，按常规法消毒备用。
②选用平菇、香菇和滑子菇等中的任意一种新鲜的菇蕾作为种菇。用手术刀将种菇菌柄下部切去后，移进接种箱内。
③用75%的酒精棉球擦拭菌盖和菌柄，以及操作者的双手进行表面消毒。
④在接种箱内酒精灯火焰旁的无菌区内，用经火焰灭菌的手术刀从菌盖到菌柄轻轻划一道口，然后用双手将种菇撕成两半，一半放在无菌培养皿内，另一半夹在左手拇指和食指中间，并将待接斜面试管夹在左手中指和无名指中间。右手拇指和食指持尖头镊子，小指和无名指夹取棉塞，将镊子尖端通过火焰灭菌冷却之后，夹取菌盖与菌柄交界处米粒大的一小块菌肉组织，投放到斜面上，将棉塞通过火焰塞回试管中，再换接另一支试管。每个学生分离接种4～5支试管。
2．菌褶抹孢法
①选择将要开伞的平菇（或香菇、滑子菇）作为种菇。种菇勿须进行表面消毒。
②将接种环通过火焰灭菌后，在无菌水中蘸一下，使接种环沾湿冷却，准确插入菌褶之间，轻轻抹取子实层上的孢子。
③在酒精灯火焰旁，用蛇形划线法将孢子接种到斜面上。每个学生分离接种2～3支试管。
3．一级菌种的转管接种 掌握一级菌种转管接种的无菌操作规程，让学生练习接种转管操作方法。每个学生接种2支试管。
4．观察记录分离接种之后，应随即贴上标签，写明菌种名称、分离接种时间以及分离接种者姓名。然后由指导教师统一收集放在23～25℃条件下培养，并规定学生定期进行观察和记录。主要记录菌丝或孢子萌发、杂菌污染等情况等。然后写出实习报告。
