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转管培养法与转瓶培养

2020.9.14

转管培养法(roller tube culture)是Gey 提出的,实验室常用,为了扩大细胞产量,将试管改用转瓶,故称转瓶培养,其培养方法是一样的,试管或转瓶固定在支加上,倾斜度为5°~10°左右,或将转瓶放在一排排转轴之间,使转瓶随着转轴以每小时6~12 转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁四周,细胞贴壁和生长只有一个表面面积,经转动一方面使培养液流动,利于细胞吸收营养和进行代谢,一方面使细胞有机会接触气体,有利于细胞呼吸和发生氧化还原作用,有利于细胞生长繁殖。培养瓶(管)内保持有相当大的上方空间,以维持合适的氧和pH 水平,通过转动可使细胞交替接触培养液和空气,营养可被充分利用。若需增加细胞产量,除可在增加转瓶的数量和容积外,使瓶直径尽可能小,此时表面面积可因直径或长度的倍增而成倍增加。
转瓶培养也可使用灌注培养系统,因此系统需要错综复杂回旋的可连续供应的管道进入瓶内,这是一种昂贵的选择。
[实验程序]:
本程序是在1400cm2(23×12cm)一次性塑料瓶上使用的(Corning 或Becton Dickinson)程序。
1、加入300ml生产培养液于转瓶中。
2、加入1.5×107细胞。
3、在37℃下,以12转/小时,转动2小时,使细胞均匀贴壁。
4、减少转动速度至5 转/小时并连续培养。
5、在倒置显微镜下使用长焦距物镜检查细胞。
6、在细胞生长至明显汇合时(5~6天),移出培养液,加入0.25%胰蛋白酶,并滚动转瓶以收获细胞。洗去胰蛋白酶,加入新鲜培养基,可转入扩大再培养。为了增加表面积,有人将转瓶表面制成带皱纹的表面或插入多层隔板。以增加表面积。

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