人软骨细胞的分化
试剂和材料：
1.分化培养基：DMEM/F12（1：1）、1%ITS（胰岛素、转铁蛋白、硒；V/V）、TGF-eta;1 1ng/ml、HEPES 10mmol/L；
2.胰蛋白酶/EDTA：胰蛋白酶（0.05%）和EDTA（0.53mmol/L）A配制；
3.A：无Ca2+，Mg2+的Dulbeccorime磷酸盐缓冲液；
4.离心管，15ml；
5.普通器皿，30ml，或圆锥底的离心管（50ml）；
实验方法：
1.从培养瓶中吸出生长培养基弃之；
2.A润洗后弃之洗液；
3.加入足量的胰蛋白酶/EDTA覆盖培养瓶底；
4.在37℃孵育5—10min（在显微镜下观察细胞是否脱落）；
5.重悬细胞，置于15ml离心管中，300g离心5min；
6.用1ml生长培养基洗涤，转移至普通器皿或离心管中；
7.用血细胞计数板对细胞进行计数；
8.重复离心（620g，10min），弃去上清液；
9.用分化培养基将其稀释到1&time106个细胞/ml；
10.按1ml/管分装到新Eendorf管中；
11.300g离心5min，上清保留不动；
12.置于37℃孵箱；
13.每2—3天更换培养基；
14.培养2—3周软骨生成。
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