罐头制品中微生物如何检测？
检测之前应完成样品消毒处理任务,这能大大提高实验结果准确性。
①进行培养检查。优选适合的培养基,样品量为1.5g或者1.5 mL,不同状态样品同时检验时,样品量各取一半。为了提高样品检验准确性,准备营养琼脂平板,确保培养基管与营养琼脂平板暴露时间一致。样品接种处理后,将二者共同放置于温箱,温箱温度为36℃,培养时间为2d,定期观察并做好观察记录。
②在显微镜设备下观察检查结果。在这一过程中,针对罐头食品进行涂片处理,待较弱火焰固定后,应用芽孢染色法完成镜检操作。对于脂肪过多的罐头制品,待弱火焰固定之后,利用二甲苯有效去除多余脂肪,接下来再次固定处理,最后进行染色镜检。
分子生物学鉴定法
①设计、合成16S rDNA的通用引物。
②提取基因组DNA。在这一过程中,应用热裂解法,该方法应用过后进行检测确认,基本方式为电泳检测法,即对PCR扩增产物进行电泳检测。在此期间,借助琼脂糖凝胶完成检测,琼脂糖凝胶用量为1.1%。
③测定序列。电泳检测操作结束后,回收DNA条带,对比分析基因序列,根据对比结果寻找菌种,接下来应用MEGA4软件进行同源性分析,有步骤、有计划地建立系统发育树。16S rDNA基因长度大约1450 bp,它作为“分子化石”的一种,常用来分析细菌分类学。电泳测试结果显示,1450 bp左右呈现亮色条带,进而能够断定扩增产物即16S rDNA,测序处理后,菌株zjz001基因长度约为1385 bp。观察并分析菌株zjz001的16S rDNA基因序列变化情况,最终证实细菌为阴沟肠杆菌。此外,新种有待深入研究、具体证实。
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综述
