WB上层胶怎么算跑好了
检测器检测。
理论上，从普通培养基中收集分泌蛋白，此时对细胞生长条件的影响最小，是最佳的实验条件：但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA（牛血清白蛋白）之类的蛋白质，除非你进一步分离纯化，否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦，尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候：用“任何”抗体去检测这一区间的蛋白，会有一片常强的信号。
因为此区间蛋白（主要是BSA）浓度过于富集，会非特异性粘附“任意”抗体从而最终被识别。同理，采用SDSLB裂解细胞制备样品前，通常要用PBS洗涤，其目的之一是去除培养基中的BSA。
采用无血清培养基收集细胞上清除了改变细胞的生理状态外（可能激活未知信号途径，诸如AKT等），还会出现的问题是：
1．即使采用了无血清收集上清，仍然有大量杂蛋白，但相对好很多。
2．选用了上清，由于蛋白浓度太稀，通常要采用TCA沉淀富集，再重新溶解。
3.TCA沉淀对半定量操作要求非常高，因为很容易沉淀不充分或者离心操作丢失，尤其在离心过程，离心管的摆放非常讲究，要180度翻转离心两次。重新溶解时，由于蛋白需要在一定的盐离子条件下才能重新溶解，你要摸索充分溶解的条件，相对麻烦。
实际上，如果你不是非常强调蛋白的分泌有什么生理功能，一般不建议检测上清，尤其半量的WB实验检测不同样品间的差异。这里面有实验操作细节的麻烦-经验之谈，我经参与的cancer cell 文章所研究的蛋白就是分泌型蛋白，但90％的数据是celllysis：偶用到上清，也只是作为富集纯化该蛋白的原料，为进一步分析做准备。
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