紫外可见分光光度计仪器校准方法
(1) 计量校准依据 参考JJG 178—2007《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》。
(2) 主要性能指标的要求 参照检定规程和仪器的说明书，在校准周期内对分光光度计进行有关关键指标的检查，以确保仪器性能正常。目前JJG 178检定规程对紫外、可见分光光度计在不同波长范围段的技术指标有不同要求，即紫外波长段A段和可见波长段B段，按性能指标的由高至低将仪器分为I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ共4个级别。下表为I级分光光度计的主要性能指标的要求(其它级仪器的性能指标要求见相关的检定规程)。
(3) 校准方法 紫外、可见分光光度计的校准主要是通过对一些有数值型的技术指标测试来进行。如波长准确度、波长重复性、光谱带宽、杂散光、分辨率、透射比误差、透射比重复性、噪声、基线平直性等，由于技术指标测试方法已有介绍，本部分主要介绍波长准确度和波长重复性、透射比准确度和透射比重复性两个项目校准的具体仪器条件或校准步骤。
① 波长准确度和波长重复性 若仪器能够放置低压汞灯的，按照检定规程用低压汞灯进行全波长测试，否则可用仪器固有的氘灯测试，取单束光能量方式，扫描速度15nm／min，响应快，最小带宽0．1nm，量程0～100％，对486．02nm和656．10nm两个单峰进行单方向重复扫描3次，测量出谱图上的2条谱线波长，波长测量的平均值与波长的标准值之差就是波长准确度，测量波长的最大值与最小值之差就是波长重复性。
② 透射比准确度和透射比重复性 取带宽2nm，用1套标准石英吸收池分别装空白溶液和质量分数为0．006000％的重铬酸钾标准溶液，在235nm，257nm，313nm，350nm四个波长处连续3次测量透射比，与检定规程中附带的标准值进行比较，测量平均值与标准值之差就是透射比准确度，测量值的最大值与最小值之差就是透射比重复性。
(4) 注意事项
① 校准前，应使仪器开机预热足够时间稳定后进行，一般至少30min后进行。
② 采用标准物质时必须注意应在标准值的复现条件 (即标准物质规定的使用条件) 下进行校准，否则会产生错误的校准结果。例如，使用GBW (E) 130066分光光度计标准溶液进行校准时，必须满足两个条件：a．被校准仪器的光谱带宽应该是2nm，若仪器光谱带宽不能调节并大于2nm，则标准溶液给出的值不适用，应该采用修正值；b．校准时所采用的两只石英比色皿应该是内径(10±0．2)mm，并且在235nm、257nm、313nm、350nm处，具有很好的配对性，这样才能复现标准值。
③ 使用标准溶液来校准时，还必须特别注意校准测量时的实验室温度，因为这些标准物质在不同温度下有不同的透射比标准值。
④ 标准用的标准物质必须在说明书规定条件下保存，例如干涉滤光片应该保存在于燥洁净的环境中，以免表面被污染、受潮开胶或霉变等。所有标准物质均应在证书上注明的有效期内使用。
⑤ 选用的中性滤光片标准值的不确定度一定要符合传递标准。校准时，要注意标准滤光片的方向性。
