生物亲和色谱仪的固定相
生物亲和色谱仪的固定相是通过先在载体(基质)表面键合一种具有一般反应性能的所谓间隔基手臂,再连接上配体(配基)而成。
一、载体:
载体有纤维素凝胶、交联葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和多孔玻璃球等,其中琼脂糖凝胶应用为广泛。
配体和载体的偶联,通常首先要进行载体活化。载体活化是指通过对载体进行一定的化学处理,使载体表面的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团。
二、配体:
配体的专一性和特异性决定着产品分离纯化的纯度,相互作用的强弱决定着吸附和解吸的难易程度。
1、配体必须具备的条件:
(1)专一性识别和特异性作用必须是可逆的。
(2)结合常数要适当。
(3)稳定性好,可进行化学改性。
2、类型:
(1)酶:底物及其类似物。
(2)辅酶:类固醇等。
(3)抗体:植物激素等。
(4)激素:糖和多糖等。
(5)抗生素:核苷酸等。
三、间隔基手臂:
在配体和载体之间引入适当长度的间隔基手臂,即加入一段有机分子,使配体离开载体向外扩展伸长,从而减少空间位阻效应,大大增加配体对待分离生物大分子的吸附效率。
间隔基手臂的长度要恰当,太短则效果不明显;太长则容易造成弯曲,反而降低吸附效率。
间隔基手臂的疏水性也需要考虑,应尽量减小对配体的影响。
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