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分子生物学常用试剂的配制(二)

2020.2.21

  15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml)

  40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

  使用时再稀释10倍。

  Tris-硼酸(TBE):5×浓贮存液(每升):54g Tris 碱

  27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

  使用时再稀释10倍。

  碱性缓冲液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH

  2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

  Tris-甘氨酸:5×浓贮存液(每升):15.1g Tris 碱

  94g 甘氨酸(电泳级)(pH8.3)

  50ml 10%SDS(电泳级)

  2×SDS 凝胶加样缓冲液

  100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)

  200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT)

  4%SDS(电泳级)

  0.2%溴酚蓝

  20%甘油

  30%丙烯酰胺:

  将29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中,加热至37℃溶解之,补加

  水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中

  保存于室温。

  10mol/L 乙酸铵:

  把770g 乙酸铵溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。

  1mol/LCaCl2:

  在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。

  2.5mol/LCaCl2:

  在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

  1mol/L 二硫苏糖醇(DTT):

  用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

  0.5mol/LEDTA(pH8.0):

  在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0,然后定容至1升,分装后高压灭菌备用。

  溴化乙锭(10mg/ml):

  在100ml水中加入1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

  1mol/LMgCl2:

  在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分装成小份并高压灭菌备用。

  酚:氯仿:

  把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层,保存于4℃。

  磷酸缓冲盐溶液(PBS):

  在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。

  乙酸钾溶液(用于碱裂解):

  在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。

  3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 7.0):

  在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0,加水定容至1升,分装后高压灭菌。

  1mol/LTris:

  在800ml水中溶解121.1gTris碱,加入浓HCl调节pH至所需值。

  pH HCl

  7.4 70ml

  7.6 60ml

  8.0 42ml

  应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1升,分装后高压灭菌。

  Tris 缓冲盐溶液(TBS):

  在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱,加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4,用蒸馏水定容至1升,分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡,于室温保存。

  5mmol/LNH4Ac 溶液:

  秤取乙酸铵192.7g,加重蒸水250ml混匀,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2灭菌20min。

  10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:

  秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。

  10%十二烷基硫酸钠(SDS):

  在900ml水中溶解100g 电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分装备用。


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