荧光定量pcr的扩增步骤中,退火可以省略吗
一般不单独加退火温度，但其实并不是省略而是合并。一般来说PCR分为变性、退火、延伸三个步骤。变性是高温下DNA双链变成单链，退火是低温下引物跟DNA模板结合，延伸是聚合酶聚合形成新链。退火温度通常随引物Tm值（常为55-60℃）设定，延伸温度则普遍用72度（Taq酶，也就是DNA聚合酶活性最高的温度）。因为这三个步骤，我们也可以称它为三步法程序。相对应的，在qPCR实验中，我们最常见的是两步法程序，①变性，②退火+延伸。荧光定量的引物在设计时，Tm选择为60℃左右，而聚合酶在60℃也仍然有较高的聚合活性，因此他们就可以合并了。在60℃，既可以退火又可以延伸，想想是不是效率就很高了呢！当然，你想用三步法程序做定量也是没问题的，预实验摸好条件即可。
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